Western blot作为科研中最基础的实验，广泛应用于蛋白表达水平的检测，同时也是评估蛋白磷酸化状态最常用的方法。

但是在实际操作中，好看的结果往往不是那么容易得到的：

» 条带形状各异，或 “^︵” 或 “_︶” 或 “拖尾” ......

» 背景太高

» 信号弱或者没有信号

» 出现黑点或黑斑

......

即使是经验丰富的“老手”依然会遇到这些问题，导致实验结果不可用还得重头再来。

那么有没有其他的实验方法，既能够做到对大多数蛋白进行半定量检测，同时又具有高灵敏的检测能力，简单且不费力呢？

Cell-based ELISA（基于细胞的ELISA）技术的应用刚好能解决小伙伴们的需求。

Cell-based ELISA介绍

Cell-based ELISA也称为Cell-ELISA或In-Cell ELISA, 是一种基于细胞的ELISA检测方法，可原位检测细胞蛋白的相对水平。该技术起源于1982年英国伯明翰大学的实验室，而后经过发展以及改进，越来越受到科研用户的青睐，目前使用该技术进行检测的文献已有1000多篇。

对激酶的假说验证和药物筛选实验，常用的检测方法有western blot、ELISA等，但是它们无法模拟细胞内的环境。而Cell-based ELISA则能在真实的细胞状态下测定蛋白磷酸化，从而更加准确地代表特定信号通路的状态，因此能在蛋白磷酸化检测中获得更好的效果。

Cell-based ELISA原理

将细胞种到96孔板上，然后对细胞进行固定透化（方便抗体进入细胞内）， 接着加入一抗二抗孵育、显色，最后测量信号。

目前检测体系分为：

1、比色法测定（酶标仪）检测；

2、荧光显色测定（荧光读板机/荧光酶标仪）。

检测原理分别如下图所示：

图1. 比色法测定

图2. 荧光显色测定

优势

1、简便省时省事，无需制备细胞裂解液。可部分替代western blot；

2、可高通量分析检测，灵敏度相比western blot要高；

3、对于磷酸化蛋白研究，可同时检测磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白水平，实现磷酸化蛋白水平的准确评估，结果更可靠。

接下来我们分享一个Cell-based ELISA应用的案例，该篇文章于2019年发表在<Molecular Cancer>（IF=16.959）杂志上^[1]。

Cell-based ELISA检测LNCaP和PC3细胞中ERK1/2的活性和总水平。

分别用不同的药物对两个细胞进行处理，然后通过Cell-based ELISA分别读出p-ERK1/2和总ERK1/2的表达水平。再对细胞进行结晶紫染色，读出吸光度，确定每孔中细胞的相对数量，最后将p-ERK1/2与总ERK1/2的比值与每孔细胞密度归一化，得出上图结果。

公司简介

Assay Genie公司成立于伦敦的生命科学试剂公司，该公司主要提供各种抗体，检测试剂盒，ELISA试剂盒等。旨在为科研工作者提供更多的检测指标，帮助他们探索科学研究。

目前Assay Genie可提供1600多种磷酸化蛋白的Cell-Based ELISA检测试剂盒，700多种普通蛋白的Cell-Based ELISA检测试剂盒。

Cell-Based ELISA的热销指标

全国客服热线｜400-7060-959

邮箱｜marketing@4abio.com

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参考文献：

[1] El Haibi CP, Sharma PK, Singh R, et al. PI3Kp110-, Src-, FAK-dependent and DOCK2-independent migration and invasion of CXCL13-stimulated prostate cancer cells. Mol Cancer. 2010;9:85. Published 2010 Apr 22. doi:10.1186/1476-4598-9-85