尽管对于特定细胞种类的细胞分离步骤的优化,与细胞恢复的各种所需特性有关,但仍可以建立通用的优化指南。结合合理的实验设计方案,以下就细胞分离和酶的使用提出优化方案,以达到满意的细胞分离效果。
低细胞数量/低活性 |
过分离,细胞损伤。选择消化活性较低的酶,和/或降低工作弄过度。(例如,从使用胰酶更换到胶原酶,或从II型胶原酶更换到I型胶原酶)。 |
低细胞数量/高活性 |
分离不足。提高酶浓度和/或反应时间,观察细胞数量和活性的变化。 如果细胞数量仍然不足,更换消化活性较高的酶和/或增加另一种酶。 |
高细胞数量/低活性 |
分离良好,细胞损伤。酶过消化和/或工作浓度过高。降低浓度和/或减少反应时间,并观察细胞数量和活性。 尝试通过加入BSA(0.1-0.5% w/v)或大豆胰酶抑制剂(0.01-0.1% w/v)稀释水解反应来分离细胞。 |
高细胞数量/高活性 |
最适实验条件! 根据评估细胞分离参数的影响,考虑其他限制因素。 |
下图显示组织分离常用酶的相对消化活性。可以根据该图以及上面的表格优化实验方案。
更多信息欢迎访问Worthington网站,在《组织分离手册》中查询:
http://www.worthington-biochem.com/tissuedissociation/default.html