【背景介绍】

自20世纪70年代Kristenson首次将辣根过氧化物酶(HRP) 应用于追踪神经纤维的联系以来，有关神经示踪剂的研究取得了迅速的发展。许多用途广泛、敏感性强、具有顺行(从轴突等到胞体)和逆行(从胞体到轴突)标记功能的追踪物质被应用到神经纤维联系的研究中，为神经解剖学的发展起到积极的推动作用。常用的神经示踪剂有辣根过氧化物酶HRP、荧光染料(如固蓝、荧光金、羰化青等)、生物素葡糖聚胺、病毒、植物凝集素等。

Fluoro-Gold荧光金也称为羟脒替（hydroxystilbamidine），为脂溶性染料，能标记细胞质，在紫外线(323nm)激发下发金黄色光(408nm)。荧光金属于慢速轴浆运输类，细胞核不着色，能很好地显示树突分支，细胞外无荧光染料渗漏，不易扩散，与周围组织分界清晰，褪色比较慢，可以经受许多组织化学染色处理，因而可以和HRP、免疫组化等方法结合使用。

Fluoro-Gold是Fluorochrome, LLC.公司的专有产品，于1985年开始在全球范围内销售。同时，Fluorochrome, LLC特别开发了高灵敏度的Fluoro-Gold^TM antibody （抗体），能够大幅度增强Fluoro-Gold的可见度。Fluorochrome, LLC.公司自1998年首次引进该抗体以来，不仅大量文献研究证实其有效性，而且成为行业检测的金标准。

 【Fluoro-Gold的优势】

   ￭ 强效的神经逆行荧光示踪剂，灵敏度高且结果稳定；

   ￭ 不会非特异性结合传代中未损伤的纤维；

   ￭ 不会渗出逆行标记的神经元；

   ￭ 标记神经元存活周期广，1天或者高于1个月；

   ￭ 可用压力注射或者离子透入（iontophoresed）的方法将染料导入动物体内；

  ￭ 与常用的其他几种神经解剖技术相兼容，比如免疫荧光术（IF），免疫细胞化学（ICC），放射自显影技术，过氧化物酶免疫组化（HRP-IHC）,石蜡包埋和其他逆行荧光示踪剂；

   ￭ 操作简便安全，保质期长；

Fig.1 Amygdala cells (40X) after Fluoro-Gold injection in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

 【Fluoro-Gold（荧光金）与Fluoro-Gold抗体结合使用的优势】

   ￭ 大幅度增强荧光金标记的可视度；

   ￭ 允许更精确的解剖标测；

   ￭ 显示相当细微的解剖结构包含树突，轴突和轴突末梢；

   ￭ 当与Vectorlabs公司VECTASTAIN ABC Kit 联合使用时，可以实现永久染色；

Fig.2 Hypothalamic cells along the 3rd left ventricle (40X) after Flouro-Gold injection  in the PVN.  Antibody is at 1/50,000.

Fluoro-Ruby红色荧光金

Fluoro-Ruby是与Fluoro-Gold和Fluoro-Gold 抗体互补的一款神经示踪剂。其本质是四甲基罗丹明葡聚糖胺(Tetramethylrhodamine dextran-amine)，分子量是10,500 Da，Ex=540 nm，Em= 600 nm，发红色荧光。

Fluoro-Ruby是一种快速、灵敏、可靠且技术操作简单的荧光示踪剂。同时也是检测早期急性轴索损伤和衰退的标志物。Fluoro-Ruby 的使用原理基本上同与Fluoro-Gold，已经流传使用多年且一致认为是领先的神经示踪剂。

Fig.3 High magnification view of Fluoro-Ruby labeled axons, terminals and vascular pericytes as seen in the rat striatum following tracer injection into the contralateral substantia nigra.