ProT2™ MHC Class II 四聚体新品来袭！

利用ProT2™ MHC Class II 四聚体检测和分离抗原特异性CD4⁺ T细胞

ProT2™ MHC Class II 四聚体可帮助用户在流式细胞仪上精确的检测抗原特异性CD4⁺ T细胞。亦可用于单个细胞分离培养，增殖及进一步研究。ProT2™ 四聚体可让客户更深入的了解在不同疾病，如自身免疫疾病、肿瘤和感染性疾病中CD4⁺ T细胞的作用和机制。

ProT2™ 四聚体由ProImmune经验丰富的科研团队研制，该团队提供高品质MHC试剂超过15年，包括世界领先的Pro5™ MHC I 类五聚体。客户订制的ProT2^TM四聚体可以在6周时间内完成。

CMV感染患者CD4⁺ T细胞表位（ProT2^TM染色）--- 数据来源于伯明翰大学Paul Moss教授课题组

图2. PBMC分别来源于CMV阳性和CMV阴性志愿者，PBMC以DRB1*07:01/PDDYSNTHSTRYVTV ProT2™ 四聚体染色。左图数据点示CMV阳性志愿者PBMC；右图表示阴性志愿者PBMC；以ProT2T^MT 四聚体对CMV阳性志愿者PBMC染色，流式分析，图中右上区域可见CD4和四聚体双阳性细胞数达到1.87%。所有设门细胞均来自CD19阴性，CD14阴性，CD3阳性的PBMC。

传统的抗原特异性CD4⁺ T细胞功能性研究，如细胞增殖或内源细胞因子分泌，并不能真实反映抗原特异性。此外，由于MHC-抗原-TCR低亲和力结合，导致抗原特异性CD4⁺ T细胞数量非常少（低于十万个白细胞一个特异CD4⁺ T细胞的比例），因此直接检测非常困难。采用最优化工艺生产的ProT2^TM四聚体可以解决这些困难，显著提高抗原特异性CD4⁺ T细胞检测的重现性和灵敏性。

ProImmune为ProT2™ MHC Class II 四聚体提供有求必应、专家型技术支持和客户服务。与那些从私人或非商业机构预订Class II 四聚体不同，客户无需申请或者预订试剂或者任何额外的肽段。ProT2™MHC Class II 四聚体承诺以严格的质控和均一的批次向客户提供快速物流。ProT2™MHC Class II 四聚体将会是ProImmune目前已有的检测CD8⁺ T细胞的Pro5™MHC Class I 五聚体的有益补充。

有效使用次数:

50 tests, 150 tests

荧光标记:

ProT2™ MHC Class II 四聚体可以标记标准的R-PE或者APC荧光；或者客户可以自行购买和偶联其他任何合适的生物素或者链霉亲和素试剂。

ProT2™ MHC Class II 四聚体产品目录:

ProImmune提供针对各种感染性疾病如流感、CMV、乙型肝炎和丙型肝炎、HIV、EBV，以及某些肿瘤相关表位的特异性ProT2™四聚体。

有效等位基因:

HLA-DR1 (DRB1*01:01); DR2 (DRB1*15:01); DR3 (DRB1*03:01)

DR4 (DRB1*04:01); DR5 (DRB1*11:01); DR7 (DRB1*07:01)

完全兼容的技术:

ProT2™ MHC Class II 四聚体可以和研究者在他们实验室已建立的其他Class II 四聚体试剂一起使用。

ProT2™ MHC Class II 四聚体特点:

1）来源于最富经验的MHC多聚体商业供应商；

2）符合ISO：9001质量体系要求的严格纯化和质量控制；

3）久经考验的抗原特异性T细胞检测技术；

4）最全面的产品目录；

5）灵活的标记选择；

6）保质期内质量保证；

7）了解客户所需的专业免疫学者提供业界领先的客户服务。

ProT2™ MHC Class II 四聚体染色

ProImmune对ProT2™ MHC Class II 四聚体应用有丰富的经验，可以帮助客户全面了解相关的应用需求，帮助他们最大程度利用该技术。

流感肽段的刺激CD4⁺T细胞表位ProT2™染色----数据来源于ProImmune

图3. 肽段PKYVKQNTLKLAT (Influenza A HA 307­­­‑319)刺激正常志愿者的PBMCs，培养13天后，DRB1*01:01/PKYVKQNTLKLAT ProT2™ 四聚体染色。左图数据点表示未用肽段刺激；右图数据点表示已被肽段刺激后的PBMCs。当志愿者细胞（等位基因为HLA-DRB1*01:01）被肽段刺激后，右上区域可见CD4和四聚体双阳性细胞。所有的数据点来源于存活的CD19阴性细胞。

ProT2™ MHC Class II 四聚体可以运用于感染性疾病如CMV（见图1）和HCV以及疫苗开发中CD4⁺ T细胞免疫应答的研究。

HCV患者CD4⁺ T细胞表位ProT2™染色---数据来源于波士顿Massachusetts General 医院Georg Lauer博士课题组

图4. HCV志愿者的PBMCs被ProT2™ 四聚体染色。左图表示等位基因为HLA-DRB1*04:01的HCV志愿者细胞，经DRB1*04:01/SGIQYLAGLSTLPGNPAIASL ProT2™ 四聚体染色后，右上区域呈现CD4和四聚体双阳性细胞；右图表示等位基因为HLA-DRB1*01:01的HCV志愿者细胞，经DRB1*01:01/TLLFNILGGWVAA   ProT2™ 四聚体染色后，右上区域呈现CD4和四聚体双阳性细胞。所有数据点来源于存活的CD19阴性CD14阴性CD3阳性的淋巴细胞设门。

HCV患者CD4⁺ T细胞表位ProT2™染色----数据来源于英国牛津大学Ellie Barnes教授课题组

图5. PBMC来源于接种疫苗后的HCV志愿者，以肽段NFPYLVAYQATVCARA刺激PBMC后继续培养；在第12天和第22天以DRB1*15:01/NFPYLVAYQATVCARA ProT2™ 四聚体对PBMCs染色。等位基因为HLA-DRB1*15:01的志愿者细胞存在CD4和四聚体双阳性细胞群，所有数据点来源于CD3阳性细胞设门。

为了帮助检测出那些超出Class II 四聚体染色标准检测范围的低频率的细胞群，需要使用膨胀型[1, 2]或增强型[3, 4]磁珠，有些非常低亲和力的抗原可能无法呈现可检测的信号值。

参考文献

[1] Novak et al. (1999). MHC class II tetramers identify peptide-specific human CD4(+) T cells proliferating in response to influenza A antigen. J Clin Invest.  104(12): R63-7. [PubMedID: 10606632].

[2] Novak et al. (2001). tetramers -guided epitope mapping: rapid identification and characterization of immunodominant CD4+ T cell epitopes from complex antigens. J Immunol. 166(11): 6665-70. [PubMedID: 11359821].

[3] Day et al. (2003). Ex vivo analysis of human memory CD4 T cells specific for hepatitis C virus using MHC class II tetramers. J Clin Invest. 112(6): 831-42. [PubMedID: 12975468].

[4] Scriba et al. (2005). Ultrasensitive detection and phenotyping of CD4+ T cells with optimized HLA class II tetramers staining. J Immunol. 175(10): 6334-43. [PubMedID: 16272285].