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免疫荧光标记技术（Immunofluorescence labeling technique）是免疫标记技术的一种，是指将已知的抗原或抗体分子标记上荧光素，使其与相对应的抗体或抗原发生特异性免疫反应，通过荧光显微镜或流式细胞术的方法，对待测物质进行定性或定量的分析，是生物学、医学领域广泛应用的免疫学技术。
四正柏新近研发了4AF647R抗体标记试剂盒（产品编号APL008），其组成包含快速标记抗体的全部所需组分。每个试剂盒可完成一次标记，每次可标记50-100μg抗体。将抗体和荧光染料简单混合于试剂盒提供的反应缓冲溶液中，进行短时间的孵育（30min）。标记结束后不需终止反应，无需进一步纯化步骤。标记前需根据表1核对抗体与标记体系的兼容性，来选择是否先进行超滤，或直接进行抗体标记步骤。
根据表1可知，标记抗体溶液可以兼容叠氮钠、低浓度的甘油、Tris、 甘氨酸、低浓度的BSA和明胶。对于不兼容的小分子抗体稳定剂，需要用试剂盒里提供的微型超滤离心管在标记前快速去除，超滤膜截留的分子量为10万，因此，小于10 kDa的组分通过膜，大于10KDa的分子，包括IgG被保留在膜上，用PBS稀释至试剂盒指定的浓度，转移到新的离心管备用。如图1所示。 接下来简单阐述下4AF647R 荧光抗体标记试剂盒操作步骤： 1. 准备待标记抗体，最佳浓度是0.5-1mg/ml 图例：本试剂盒标记抗CD3抗体的染色效果。显示标记抗体能够将人外周CD3阳性细胞与阴性细胞清晰分群，且有较强的荧光信号。提示本试剂盒标记效果佳。 01 使用偶联试剂盒前是否需要纯化抗体？ 02 BSA或明胶是否影响抗体标记？ 浓度不超过0.1% 的 BSA和明胶对化学偶联的影响很小。 03 抗体会形成高分子量聚集体吗？ 在试剂盒建议的浓度范围内不会。 四正柏提供抗体标记试剂盒产品列表 请联系四正柏生物。
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微型超滤离心管组分
2. 将反应溶液和抗体以1:10比例混合，充分混匀
3. 将上述溶液混合物转移至染料瓶，涡旋，室温孵育30min
4. 用抗体储存溶液稀释孵育后的抗体，待用。标记抗体的浓度等于起始抗体标记的数量除以总体积。标记后的抗体储存于4℃，至少可稳定保存6个月
产品特点/优势
2. 抗体回收率达100%，标记效果好，染色效果佳；
3. 为共价标记，在多色实验中，不会发生抗体间的染料转移现象；
4. 标记抗体检测通道匹配大多数实验室的流式细胞仪，实用性广；
5. 与相同荧光标记的同类试剂盒相比，性价比高。
标记抗体染色图
如果抗体能够达到试剂盒要求的纯度即不需再次纯化。
该试剂盒是针对IgG抗体标记优化设计的，不建议标记其他蛋白质。4AF647R标记条件可能导致 IgM 抗体变性。
可以的，此标记为共价标记，不会发生荧光染料的转移。
直接免疫荧光染色操作简单，免去了二抗孵育和洗涤的步骤，允许来自同一物种的多个抗体同时孵育，避免了抗体的交叉反应，减少了实验的复杂性；且可以节约经费。
不可以，因为这些样本非抗体蛋白含量过高，而抗体含量低。
本试剂盒可以标记源于不同种属的抗体，但检测的目的抗原需要针对该抗原（包括种属）的特异性抗体。如检测人样本的抗CD3抗体，用于标记的CD3抗体应该来源于小鼠或大鼠。
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