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阶段一
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按照标准免疫程序免疫5只Balb/c小鼠。采用ELISA法测定血清滴度。
大约需要3-4mg蛋白免疫原或2mg多肽-KLH交联物作为免疫原。 2mg多肽-BSA交联物作为筛选用抗体。
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阶段二
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当血清中抗体滴度达到融合要求后，进行细胞融合。
ELISA方法检测杂交瘤细胞培养上清，筛选出抗体阳性的杂交瘤细胞克隆，进行克隆化，筛选出稳定分泌抗体的克隆，扩大培养。
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阶段三
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测定抗体Ig的亚型。
将杂交瘤培养上清送客户评价。
提供客户选择的3-5个克隆生产腹水（每只小鼠可获得1-4ml腹水）。
提供3-5株杂交瘤细胞株。
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操作
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天数
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备注
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免疫
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0
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首次免疫 150-500ug/只，与弗氏完全佐剂混合，皮下多点注射 |
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21
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再次免疫 相同剂量与弗氏不完全佐剂混合，皮下多点注射 | |
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42
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加强免疫 相同剂量与弗氏不完全佐剂混合，皮下多点注射 | |
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70
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加强免疫 相同剂量与生理盐水混合，耳静脉注射 | |
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采血
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0
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采集对照血清，2ml |
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77
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采集血清2ml，测效价 | |
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78
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放血，约30-50ml血清/兔 |
